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            四大重要特點讓DNA聚合酶得到了改進

            發布日期: 2019-12-18
            瀏覽人氣: 2608
               DNA聚合酶在新DNA鏈合成中扮演著重要的角色,是PCR反應不可或缺的組成部分。因此,充分了解聚合酶的特點以及高級DNA酶今后的發展方向,對于將PCR方法推廣到各種生物學實驗應用至關重要。自從在早期PCR實驗中開始使用TaqDNADNA聚合酶至今,其特異性、熱穩定性、保真度和合成能力得到了明顯的改進。在選擇之前,先了解一下DNA聚合酶的四個重要特點:熱穩定性,保真度,擴增速度及特異性。
              熱穩定性
              熱穩定性是指DNA聚合酶能夠耐受高溫的能力。不同的DNA聚合酶的熱穩定性差異較大,一般通過半衰期來體現。由于熱循環是DNA擴增重復鏈式反應條件的關鍵特征,因此,所使用DNA聚合酶的熱穩定性非常重要。盡管初來自于嗜熱菌菌株的TaqDNA聚合酶可耐受相對較高的溫度,但是其半衰期在90°C以上時明顯縮短。當使用長時間高溫使具有二級結構和富含GC序列的DNA變性時,這一缺陷便成為一大難題。
              保真度
              保真度是指DNA聚合酶復制DNA模板的能力。部分DNA聚合酶具有3’-5’的核酸外切酶活性,能夠校正錯誤堿基。保真度的高低可通過錯配率來體現。DNA聚合酶的校正能力決定了保真度,會影響DNA序列復制的準確性。因此,高保真DNA聚合酶就是具有強校正活性的酶。DNA聚合酶準確復制DNA序列(即獲得無錯誤序列)的能力對分子克隆、測序和定點突變等實驗應用至關重要。
              擴增速度
              擴增速度是指在延伸時,DNA聚合酶向DNA新鏈中摻入核苷酸的速率。擴增速度除與DNA聚合酶有關,還會受到延伸溫度,緩沖液及模板復雜程度等的影響。
              特異性
              特異性是指DNA聚合酶在PCR過程中只擴增目的片段的能力。為了提高PCR特異性,常通過抗體法或配體法等方式對DNA聚合酶進行修飾,使酶活性在低溫條件下封閉,減少非特異性延伸和擴增。
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