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            瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒在使用中有很多細節要遵守

            發布日期: 2020-01-15
            瀏覽人氣: 1661
               使用瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒回收的DNA可適用于各種常規操作,包括酶切、PCR、測序、文庫篩選、連接和轉化等試驗。瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒采用可以高效、專一結合的DNA硅基質材料和獨特的緩沖液系統,從TAE或TBE瓊脂糖凝膠上回收DNA片段,同時除去蛋白質、其他有機化合物、無機鹽離子及寡核苷酸引物等雜質??苫厥?00bp-10kb大小的片段,回收率大于80%。使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇,加入體積請參照瓶體上的標簽。
              1、瓊脂糖凝膠電泳后,將單一的目的DNA條帶從瓊脂糖凝膠中切下(盡量切除多余部分),放入干凈的離心管中,稱取重量。
              2、向膠塊中加入3倍體積溶膠液(如果凝膠重為0.1g,其體積可視為100ul,則加入300ul溶膠液),50-55℃水浴放置10min,期間不斷溫和地上下翻轉離心管,以確保膠塊充分溶解。
              注意:溶膠時,如果溶膠液變為紅色(正常情況下為淡黃色),可向含有DNA的膠溶液中加入10-30ul3M醋酸鈉(pH5.2)將膠溶液調為淡黃色,否則將會影響DNA與吸附柱的結合,影響回收效率。
              3、將上一步所得溶液加入一個吸附柱中(吸附柱放入收集管中),12000rpm離心30-60秒,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放入收集管中。
              4、向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。
              5、向吸附柱中加入600ul漂洗液,12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。
              6、12000rpm離心2min,盡量除去漂洗液。將吸附柱敞口置于室溫或50℃溫箱放置數分鐘,目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,防止漂洗液中的乙醇影響后續的實驗。
              7、將吸附柱放入一個干凈的離心管中,向吸附膜中央懸空滴加適量經65℃水浴預熱的洗脫液,室溫放置2min,
              12000rpm離心1min。
              注意:1)、為了增加回收效率,可將得到的洗脫液重新加入吸附柱中,12000rpm再次離心1min。
              2)、洗脫緩沖液體積不應少于30ul,體積過小影響回收效率。
              3)、洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響,若用水做洗脫液應保證其pH值在7.0-8.5之間。
              8、DNA產物-20℃保存。
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