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            從基礎去認識微量細胞核酸

            發布日期: 2021-09-15
            瀏覽人氣: 203
               它主要目的在于提供一種適用于超微量細胞核酸提取的試劑盒及方法,以解決現有技術中難以對少于50個細胞的超微量樣本進行核酸提取的問題。本試劑盒基于硅膠柱純化技術,提取過程中無需使用有毒的酚氯抽提,也無需進行耗時的醇類沉淀,整個過程只需35分鐘。
              
              臨床及生物醫學研究中常常需要從各種生物組織或細胞中抽提基因組dna或mrna,應用核酸擴增技術測定其成分,這是用于病癥的輔助性分析和診斷的一種高度敏感,且最為直接的檢測手段。所以核酸提取是生物醫學研究和臨床上進行基因表達水平檢測、基因克隆或測序等工作之前,樣品處理的必要步驟。
              
              生物樣品,如培養的細胞、動植物組織、體液(如血液、分泌物、棉拭子、膿液、痰液、組織液等)、微生物樣品等都需要經過適當的處理,將其中的核酸提取出來進行下一步的分析,如基因表達水平檢測、基因克隆或測序等。目前常用的核酸提取試劑中都采用胍鹽、表面活性劑、酚、氯仿等作為樣品裂解、核酸純化試劑;常用的操作方法有手工法、吸附柱法和磁珠法等。
              
              微量細胞核酸中核酸提取方法種類很多,如酚、氯仿等有機溶劑抽提法、硅膠膜吸附柱法等。但由于操作過程中使用到各種有機溶劑會危害人體健康,操作步驟繁瑣復雜,單位時間通量低不易實現自動化,提取出的核酸濃度純度較低等因素為傳統核酸提取技術的瓶頸。
              
              目前對于臨床珍貴的組織樣本、穿刺樣本或法醫取證的少量樣本dna、rna共提取的方法依然是將細胞裂解液分成兩部分,一部分用trizol法(即硫氰酸胍-酚-氯仿抽提法)提取rna,一部分用酚-氯仿-異丙醇-乙酸氨法抽提或者是膜吸附柱的方法提取dna和rna。無論是trizol法還是膜吸附柱法提取核酸,都是基于組織樣本或者是穿刺樣本,細胞數量遠遠超過100個。而對于臨床微量細胞樣本,當細胞數量只有5-20個,或細胞數量小于50個時,現有的技術方案并不適用于同時提取超微量細胞中的dna和rna。
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